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發(fā)布日期:2024-11-27

一、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)的工作流程SICOLAB

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)的工作流程為:實(shí)驗(yàn)室樣品到樣驗(yàn)收(確定是否具備檢驗(yàn)的基本條件)→混樣→獲取測(cè)試樣品→測(cè)試樣品的制備(待檢狀態(tài))→核酸和(或)蛋白等目標(biāo)物質(zhì)的提取→PCR實(shí)驗(yàn)(包括擴(kuò)增和產(chǎn)物分析)和(或)蛋白質(zhì)檢測(cè)→結(jié)果判定→結(jié)果表述,出具檢驗(yàn)報(bào)告。

二、實(shí)驗(yàn)室測(cè)試樣品的要求SICOLAB

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)所接收的待檢樣品應(yīng)置于原始包裝袋(或容器)中,不能接收從其他檢測(cè)、檢驗(yàn)等分出來(lái)的樣品,以避免樣品間交叉污染。

三、實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和環(huán)境要求SICOLAB

1、用于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施和壞境要求應(yīng)符合G5/T15481-2000的規(guī)定。

2、用于核酸檢驗(yàn)的轉(zhuǎn)因產(chǎn)品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室,有條件的宜在所分隔的各工作區(qū)域設(shè)置緩沖間,緩沖間的壓力為負(fù)壓(或上設(shè)抽風(fēng)裝置),與其工作相連的工作間為正壓,工作間與緩沖間之間宜安裝磁性連鎖裝置。受實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所限制而無(wú)條件設(shè)置緩沖間的實(shí)驗(yàn)室,在對(duì)檢測(cè)區(qū)域進(jìn)行功能劃分后,應(yīng)根據(jù)本文第四條屮的規(guī)定設(shè)置實(shí)驗(yàn)室的壓力。非實(shí)驗(yàn)人員不應(yīng)進(jìn)入各實(shí)驗(yàn)工區(qū)。

3、不同功能的核酸檢驗(yàn)工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的工作室,并有明顯的標(biāo)志,各區(qū)間不能直通。各區(qū)之間如果是緊密相連,需安裝物品傳遞艙。

4、每個(gè)工作區(qū)域的頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長(zhǎng)為254nm,安裝數(shù)量為每20m2安裝一支40W的紫外燈,燈與地面的距離不宜超過(guò)2.0m±0.1m

四、實(shí)驗(yàn)室工作順序SICOLAB

所有實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在規(guī)定的區(qū)域進(jìn)行,待檢樣品的流動(dòng)應(yīng)遵照轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)工作流程的順序,嚴(yán)格按單一方向進(jìn)行。
農(nóng)產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)裝修

五、實(shí)驗(yàn)室功能間內(nèi)容SICOLAB

(一)核酸檢驗(yàn)區(qū)

1、試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)

a)主要功能:原裝試劑和配制試劑的貯存,所有試劑的配制與分裝。

b)工作區(qū)域的壓力要求:未設(shè)緩沖間的試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),工作區(qū)域?yàn)檎龎骸?/p>

c)注意事項(xiàng):當(dāng)試劑經(jīng)質(zhì)檢合格后,應(yīng)將其分裝貯存?zhèn)溆?,貯存試劑的分裝體積根據(jù)通常在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一次測(cè)定所需的擴(kuò)增反應(yīng)數(shù)決定。用于擴(kuò)增的試劑應(yīng)冰凍貯存。

2、樣品制備區(qū)

a)主要功能:實(shí)驗(yàn)室樣品的混樣和測(cè)試樣品的制備。

b)工作區(qū)域的壓力要求:未設(shè)緩沖間的樣品制備區(qū),工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓,可安裝排風(fēng)系統(tǒng)。

c)注意事項(xiàng):此區(qū)應(yīng)遠(yuǎn)離其他實(shí)驗(yàn)操作區(qū);粉碎樣品時(shí)的器皿應(yīng)單獨(dú)使用,所用的器具在使用前經(jīng)過(guò)徹底清洗并高壓消毒,防止交叉污染;稱(chēng)取的測(cè)試樣品應(yīng)加蓋后再移至樣品核酸制。

3、核酸制備區(qū)

a)主要功能:核酸的提取純化與貯存;核酸含量的測(cè)定;測(cè)試樣品DNA的保存。

b)工作區(qū)域的壓力要求:未設(shè)緩沖間的核酸制備區(qū),工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓,可安裝排風(fēng)系統(tǒng)。

c)注意事項(xiàng):已純化的核酸應(yīng)保存于-20℃或-80℃,避免反復(fù)凍融;陽(yáng)性和陰性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)DNA可調(diào)整至常用的使用濃度后分裝并冷凍保存。

4、擴(kuò)增區(qū)

a)主要功能:PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和模板的加入,核酸擴(kuò)增。

b)工作區(qū)域的壓力要求:未設(shè)緩沖間的擴(kuò)增區(qū),工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓,可安裝排風(fēng)系統(tǒng)

c)注意事項(xiàng):嚴(yán)格限制無(wú)關(guān)人員出入并減少在本區(qū)內(nèi)走動(dòng);加樣應(yīng)在超凈工作臺(tái)(生物安全柜)內(nèi)進(jìn)行,超凈工作臺(tái)的氣流方向宜選擇垂流式;巢式PCR的第二次加樣必須在此區(qū)進(jìn)行。
PCR實(shí)驗(yàn)室裝修

5、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

a)主要功能:擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。

b)工作區(qū)域的壓力要求:未設(shè)緩沖問(wèn)的擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū),工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓,應(yīng)安裝排風(fēng)系統(tǒng)。

c)注意事項(xiàng):此區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,應(yīng)遠(yuǎn)離其他實(shí)驗(yàn)操作區(qū);使用 PCR-ELISA方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí),應(yīng)使用洗板機(jī)洗板。

注:若實(shí)驗(yàn)僅采用全自動(dòng)擴(kuò)增檢測(cè)儀(如實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀),可將擴(kuò)增區(qū)與擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)合并為一個(gè)區(qū)。

(二)蛋白質(zhì)檢驗(yàn)區(qū)

1、蛋白質(zhì)分離純化區(qū)

本工作區(qū)域的功能是用于蛋白質(zhì)的分離與純化。蛋白質(zhì)純化應(yīng)具備低溫工作的場(chǎng)地,如4℃冷房和(或)層析柜等。

2、蛋白質(zhì)檢測(cè)區(qū)

本,作區(qū)域的功能是蛋白質(zhì)分析檢測(cè)。

3、其他區(qū)域

可設(shè)置洗滌消毒空【洗滌、消毒、制備純水或雙蒸水、制冰等】、高速/超高速離心機(jī)室、低溫/超低溫冰箱室等。
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