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發(fā)布日期:2024-11-25

PCR實驗是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。PCR(Polymerase Chain Reaction)即 聚合酶鏈式反應,又稱無細胞分子克隆系統(tǒng)或體外酶促基因擴增法。是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法,也是生物學、醫(yī)學臨床等領(lǐng)域廣泛應用的實驗技術(shù)。PCR實驗又稱臨床基因擴增實驗,通過將病毒體內(nèi)所含的基因進行擴增,即將微量的DNA大幅增加,以測出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。

一、實驗室布局形式

(一)分散式

    各實驗用房彼此相距較遠,呈分散布置形式。

    各實驗之間不易相互干擾。

    除各實驗室自身做好防護,防止外界環(huán)境對實驗造成影響外,其它無特殊條件要求。

(二)組合式

    完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,形成集中、獨立的實驗區(qū)域。

    每個實驗室應設(shè)置獨立緩沖間、實驗室間應設(shè)置帶消毒裝置的傳遞窗。
PCR實驗室裝修

二、實驗室功能房間主要功能和儀器配置清單

(一)試劑儲存和準備區(qū)

試劑的制備和貯存,試劑的分裝,主反應混合液的制備。儀器有2-8℃和-15℃冰箱、混勻器、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)、移動紫外燈(近工作臺面)、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)、專用工作服和工作鞋、專用辦公用品。

(二)試劑儲存和準備區(qū)

核酸(RNA、DNA)提取、貯存擴增反應管的制作。儀器有2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱、高速臺式冷凍離心機、混勻器、水浴箱或加熱模塊、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)、可移動紫外燈(近工作臺面)、生物安全柜、一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)、專用工作服和工作鞋、專用辦公用品、如需處理大分子DNA,應具有超聲波水浴儀。

(三)擴增反應混合物配置和擴增區(qū)

DNA或cDNA擴增。核酸擴增儀、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)、可移動紫外燈(近工作臺面)、一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)、專用工作服和工作鞋、專用辦公用品。

(四)擴增產(chǎn)物分析區(qū)

擴增片段的測定。視檢驗方法不同而定。基本儀器有微量加樣器(覆蓋1-1000ul)、可移動紫外燈(近工作臺面)、一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭(帶濾心)、專用工作服、工作鞋、專用辦公用品。

三、PCR實驗室通風與空調(diào)系統(tǒng)設(shè)計

(一)標準規(guī)范

《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》

《生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范》 GB50346-2011

《臨床基因擴增(PCR)檢驗實驗室規(guī)范》

(二)實驗室暖通設(shè)計參數(shù)
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(三)實驗室氣流流向設(shè)計

為避免交叉污染,PCR實驗室空氣流向必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)。氣流組織采用上送下排,送風口和排風口布置應使室內(nèi)氣流停滯的空間降低到最小程度。在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點的上方附近不得設(shè)送風口。高效過濾器排風口應設(shè)在室內(nèi)被污染風險最高的區(qū)域,單向布置,不得有障礙。

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