一、什么是PCR
PCR 是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction）的簡稱，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的 DNA 片段，可看作生物體外的特殊 DNA 復(fù)制。
二、PCR實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的危害
PCR 實(shí)驗(yàn)室研究過程中，很多操作都會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，比如離心、混勻等操作。
三、PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心
為保證環(huán)境安全，PCR 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)需獨(dú)立區(qū)域設(shè)計(jì)，避免與其余環(huán)境的交叉混雜，因此臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問題是如何避免污染。
四、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)方案
PCR 實(shí)驗(yàn)室是臨床基因診斷的工作場所，與普通實(shí)驗(yàn)室相比，檢測必須在無菌無塵環(huán)境下進(jìn)行操作，對(duì)生物安全防護(hù)、操作規(guī)范、質(zhì)量控制、管理等各項(xiàng)要求更為嚴(yán)格。PCR 實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)從設(shè)計(jì)施工、設(shè)備配套、試劑耗材、場地驗(yàn)收、人員培訓(xùn)每個(gè)階段都應(yīng)詳細(xì)考量。為了最大程度的避免在檢測過程中出現(xiàn)污染、假陽性和假陰性等現(xiàn)象，PCR 實(shí)驗(yàn)室要按照四個(gè)區(qū)域分區(qū)設(shè)計(jì)為宜；實(shí)驗(yàn)室的布置不僅考慮實(shí)用，同時(shí)要兼顧疏散，人流物流嚴(yán)格分流；設(shè)計(jì)合理壓力梯度保證氣流單向流動(dòng)防止氣溶膠污染。
（一）分區(qū)設(shè)計(jì)
試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
（二）單向流向
為避免交叉污染，工作人員進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，嚴(yán)禁逆向進(jìn)入各區(qū)。
（三）實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制
PCR 實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。排風(fēng)的處理方式也需考慮新冠的排風(fēng)要求。
1、試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
面積：20-30平；
壓力：+20Pa；
換氣次數(shù)：10-15次/h
2、進(jìn)入試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)的緩沖間
壓力：+10Pa。
換氣次數(shù)：10-15次/h
3、標(biāo)本制備區(qū)主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定 RNA 時(shí) cDNA 的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。
3、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)主要進(jìn)行的操作為 DNA 或 cDNA 擴(kuò)增。此外，已制備的 DNA 模板和合成的 cDNA(來自樣本制備區(qū)) 的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū)) 制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式 PCR 測定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。
4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測定。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。
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